(71)申请人云南龙津康佑生物医药有限公司地址650503云南省昆明市呈贡区马金铺兰茂路789号

　　本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测方法,包括,A)将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,B)采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量。本发明通过将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂的供试品溶液通过高效液相色谱进行仔细的检测,得到该复方制剂中杂质的含量。通过验证,确认该检测的新方法不仅仅可以有效实现奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中主成分及各个的杂质的良好分离,而且检测的新方法稳定,结果准确,对色谱柱的损耗较小,能够延长色谱柱的使用寿命。

　　A)将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,

　　色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶,流动相A为pH值为2.3,3.0的三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1:200(300)流动相B为乙腈,流动相为梯度洗脱。

　　2.根据权利要求1所述的检测的新方法,其特征是,还包括制备参照物溶液,分别取奥美沙坦酯杂质A、氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、奥美沙坦酯杂质C,奥美沙坦酯杂质D采用稀释剂溶解,得到参照物溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照体积比3,7比例混合,

　　将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定,得到参照物的色谱图,并根据参照物的色谱图对奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂中杂质的图谱的成分进行定性和定量测定。

　　氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、D的含量采用主成分自身对照加校正因子法计算,奥美沙坦酯杂质A、C及未知杂质采用主成分自身对照法计算,

　　以主峰奥美沙坦酯计算相对保留时间,相对保留时间小于氨氯地平的杂质峰,除奥美沙坦酯杂质A外,均归属为氨氯地平的杂质峰,相对保留时间大于氨氯地平的杂质峰均归属为奥美沙坦酯的杂质峰。

　　7.根据权利要求6所述的检测的新方法,其特征是,所述流动相流速为1.3,1.7ml/min,检测波长为254nm,检测器为二极管阵列检测器,进样量为10μl,自动进样器温度为5℃,色谱柱柱温40℃,50℃,所述流动相A三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1:200,

　　8.根据权利要求1所述的检测的新方法,其特征是,所述奥美沙坦酯的进样浓度为

　　9.根据权利要求1所述的检测的新方法,其特征是,所述步骤A)具体为,将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂加占总体积20,的水,超声3(5min)直至完全崩解,加占总体积40,的乙腈,超声3(5min)加占总体积30,的稀释剂,超声10(15min)放至室温,加稀释剂定容摇匀,再离心取上清液,过滤,即得供试品溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照3,7比例混合。

　　10.根据权利要求1所述的检测的新方法,其特征是,所述奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂选自片剂、胶囊剂、口服液或颗粒剂中的一种。

　　[0001]本申请要求于2022年02月24日提交中国专利局、申请号为4.9、发明名称为“一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法”的中国专利申请的优先权,其全部内容通过引用结合在本申请中。

　　[0002]本发明涉及药物分析技术领域,尤其是涉及一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法。

　　[0003]奥美沙坦酯与氨氯地平的复方制剂其处方中的2个原料药分别是奥美沙坦酯与苯磺酸氨氯地平,其化学结构如下,

　　[0005]奥美沙坦酯氨氯地平片属于固定剂量组成的复方制剂,目前国内已有上市产品。临床研究证实,奥美沙坦酯与氨氯地平联合用药能有效控制血压,二者联合应用不仅能降血压还具有保护心血管的功效。因此开发该复方制剂对提供一种疗效确切、安全方便且副作用小的治疗高血压的药物显得十分重要。

　　[0006]《美国药典》(USP‑NF)已收载奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂有关物质检测的新方法,该方法供试品前处理方法为取本品不少于5片,加占总体积20,的水超声5min,加占总体积

　　20,的乙腈超声5min,再加占总体积30,的稀释剂(乙腈‑水(50)50)超声15min,加稀释剂定容摇匀,将上述溶液,离心10min后用0.45μm滤膜过滤。具体色谱条件,流动相A为6.9g/L 磷酸二氢钠缓冲液,加磷酸调节pH值为2.50,流动相B为乙腈,色谱柱填充剂为苯基硅烷键合硅胶,4.6mm×250mm,5μm,流速为2.0ml/min,检测波长为254nm,自动进样器温度为5℃。

　　[0007] 经试验验证,《美国药典》USP‑NF收载的奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂有关物质检测方法主要存在的问题就在于,1、专属性方面,已知杂质与未知杂质分离度不理想,特别是在稳定性考察产生新的降解产物时,个别杂质无法有效分离。2、色谱柱温度设定为60℃,易引起色谱柱中填料过早老化或流失,导致色谱柱和高效液相色谱仪损伤。3、供试品前处理采用的稀释剂为乙腈‑水(50)50,该稀释剂含有高浓度的乙腈,会造成溶剂效应,导致主成分峰异常,且检测成本增加,处理废液的环保压力大。

　　[0008] 《美国药典》(USP‑NF)中已对奥美沙坦酯氨氯地平片中已知杂质进行了介绍,主要已知杂质结构如下,

　　[0010] 因此,提供一种分离度高、稳定性高和重现性好的奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂中杂质的检测的新方法是非常必要的。

　　[001 1] 有鉴于此,本发明要解决的技术问题就在于提供一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,本发明方法分离度高、稳定性高和重现性好。

　　[0012] 本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,其特征是,包括,

　　[0013] A)将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,

　　[0014] B)采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量,

　　[0016] 色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶,流动相A为pH值为2.3,3.0的三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1 :200(300)流动相B为乙腈,流动相为梯度洗脱。

　　[0017] 优选的,还包括制备参照物溶液,分别取奥美沙坦酯杂质A、氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、奥美沙坦酯杂质C,奥美沙坦酯杂质D采用稀释剂溶解,得到参照物溶液,所述

　　[0018] 将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定,得到参照物的色谱图,并根据参照物的色谱图对奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂中杂质的图谱的成分进行定性和定量测定。

　　[0020] 氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、D的含量采用主成分自身对照加校正因子法计算,奥美沙坦酯杂质A、C及未知杂质采用主成分自身对照法计算,

　　[0021] 以主峰奥美沙坦酯计算相对保留时间,相对保留时间小于氨氯地平的杂质峰,除奥美沙坦酯杂质A外,均归属为氨氯地平的杂质峰,相对保留时间大于氨氯地平的杂质峰均归属为奥美沙坦酯的杂质峰。

　　2.0ml/min,检测波长为210(260nm)检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器,进样量为10μl,自动进样器温度为3,7℃。

　　[0028] 优选的,所述流动相流速为1 .3,1 .7ml/min,检测波长为254nm,检测器为二极管阵列检测器,进样量为10μl,自动进样器温度为5℃,色谱柱柱温40℃,50℃,所述流动相A

　　三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1 :200(300)加磷酸调节pH至2.6,2.7。

　　[0030] 优选的,所述步骤A)具体为,将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂加占总体积20,的水,超声3(5min)直至完全崩解,加占总体积40,的乙腈,超声3(5min)加占总体积30,的稀释剂,超声10(15min)放至室温,加稀释剂定容摇匀,再离心取上清液,过滤,即得供试品溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照3,7比例混合。

　　[0031] 优选的,所述奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂选自片剂、胶囊剂、口服液或颗粒剂中的一种。

　　[0032] 与现存技术相比,本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,包括,A)将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,B)采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量,色谱参数为,色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶,流动相A为pH值为2.3,3.0的三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1 :200(300)流动相B为乙腈,流动相为梯度洗脱。本发明通过将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂的供试品溶液通过高效液相色谱进行仔细的检测,得到该复方制剂中杂质的含量。通过验证,确认该检测的新方法不仅仅可以有效实现奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中主成分及各个的杂质的良好分离,而且检测的新方法稳定,结果准确,对色谱柱的损耗较小,能够延长色谱柱的使用寿命。

　　[0034] 图2为奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂供试品溶液的高效液相色谱图,

　　[0035] 图3为更改流动相A为三氟乙酸三乙胺缓冲液的高效液相色谱图,

　　[0037] 本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,本领域技术人能借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,有关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。

　　[0038] 本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,其特征是,包括,

　　[0039] A)将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,

　　[0040] B)采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量,

　　[0042] 色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶,流动相A为pH值为2.3,3.0的三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1 :200(300)流动相B为乙腈,流动相为梯度洗脱。

　　[0043] 本发明提供的奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法旨在检测奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中的如下杂质式(I)氨氯地平杂质A、式(II)奥美沙坦酯杂质A、式(III)奥美沙坦酯杂质B、式(IV)奥美沙坦酯杂质C,式(V)奥美沙坦酯杂质D。

　　[0045] 本发明所述奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂选自片剂、胶囊剂、口服液或颗粒剂中的一种,本发明对其不进行限定,本领域技术人员熟知的即可。

　　[0046] 本发明首先将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液。

　　[0047] 本发明优选具体为,将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂加占总体积20,的水,超声3(5min)直至完全崩解,加占总体积40,的乙腈,超声3(5min)加占总体积30,的稀释剂,超声10(15min)放至室温,加稀释剂定容摇匀,再离心取上清液,过滤,即得供试品溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照3,7比例混合。

　　[0048] 更优选具体为,将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂加占总体积20,的水,超声5min,直至完全崩解,加占总体积40,的乙腈,超声5min,加占总体积30,的稀释剂,超声15min,放至室温,加稀释剂定容摇匀,再离心取上清液,过滤,即得供试品溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照3,7比例混合。

　　[0049] 所述离心具体为,将溶液于5000rpm离心10min,取上清液,所述过滤具体为,用

　　[0050] 本发明还包括制备参照物溶液,分别取奥美沙坦酯杂质A、氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、奥美沙坦酯杂质C,奥美沙坦酯杂质D采用稀释剂溶解,得到参照物溶液,所述稀释剂为乙腈和水按照3,7比例混合,

　　[0051] 将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定,得到参照物的色谱图,并根据参照物的色谱图对奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂中杂质的图谱的成分进行定性和定量测定。

　　[0053] 氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质B、D的含量采用主成分自身对照加校正因子法计算,奥美沙坦酯杂质A、C及未知杂质采用主成分自身对照法计算,

　　[0054] 以主峰奥美沙坦酯计算相对保留时间,相对保留时间小于氨氯地平的杂质峰,除奥美沙坦酯杂质A外,均归属为氨氯地平的杂质峰,相对保留时间大于氨氯地平的杂质峰均归属为奥美沙坦酯的杂质峰。保留时间在2.5min内的峰为溶剂峰及苯磺酸峰忽略不计。

　　[0056] 采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量。

　　[0061] 所述高效液相色谱检测的波长优选为210(260nm)更优选为254nm,高效液相色谱的检测器优选为二极管阵列检测器或紫外检测器进行仔细的检测,更优选为二极管阵列检测器。

　　[0070] 本发明在上述洗脱梯度下基线分离好,各个峰分离度好,基线μl,自动进样器温度为3,7℃,优选为5℃。

　　[0073] 线性溶液结果,奥美沙坦酯的线,奥美沙坦酯杂质A线,奥美沙坦酯杂质B线,奥美沙坦酯杂质C线,奥美沙坦酯杂质酯D线,氨氯地平线,氨氯地平杂质A线] 本发明检测的新方法具有分离度高、稳定性高和重现性好的特点。可将该复方制剂中的已知杂质和未知杂质有效分离,色谱峰形较好,且色谱柱常规使用的寿命长,对高效液相色谱仪

　　[0075] 本发明提供了一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测的新方法,包括,A)将奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂采用溶剂溶解,超声,过滤,得到供试品溶液,B)采用高效液相色谱对供试品溶液进行测定,得到该复方制剂中杂质的含量,色谱参数为,色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶,流动相A为pH值为2.3,3.0的三乙胺水溶液,所述三乙胺和水的体积比为1 :200(300)流动相B为乙腈,流动相为梯度洗脱。本发明通过将奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂的供试品溶液通过高效液相色谱进行仔细的检测,得到该复方制剂中杂质的含量。通过验证,确认该检测的新方法不仅仅可以有效实现奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中主成分及各个的杂质的良好分离,而且检测的新方法稳定,结果准确,对色谱柱的损耗较小,能够延长色谱柱的使用寿命。

　　[0076] 为了进一步说明本发明,以下结合实施例对本发明提供的一种奥美沙坦酯氨氯地平片复方制剂中杂质的检测的新方法进行详细描述。

　　4.6mm×250mm,5μm,检测波长为254nm,流速为1 .5ml/min,柱温为45℃,自动进样器温度为5℃,流动相A为4ml三乙胺置1000ml水中加磷酸调节pH值为2.50,流动相B为乙腈。按照下列梯度进行洗脱,

　　[0080] 系统适用性溶液,称取苯磺酸氨氯地平、奥美沙坦酯及氨氯地平杂质A、奥美沙坦酯杂质A、B、C、D对照品适量加稀释剂配制成一定浓度的溶液进行仔细的检测。图1为系统适用性溶液检测谱图,检测结果如表1所示。

　　[0083] 综上结果,奥美沙坦酯复方制剂中各主要已知杂质与主成分峰之间的分离度均大

　　10.56mg,加稀释制成储备液2、3、4、5,精密称取磺酸氨氯地平对照品43.47mg,加稀释制成储备液6,精密称取氨氯地平杂质A对照品40.39mg,加稀释剂制成储备液7。